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（一）水空白：

比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意義主要是對光路系統(tǒng)進(jìn)行檢查和校正，如光源，比色杯等，同時在計算中起到消除“杯差”的作用。

（二）樣本空白：

由于溶血、脂血、黃疸等情況，會導(dǎo)致樣本本身的吸光度對測試結(jié)果造成影響。所以對樣本本身吸光度的測量，即樣本空白，可以去除這方面的影響。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量，把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來進(jìn)行測量。自動生化儀上，很難界定樣本空白。與消除樣本空白有關(guān)的大約有如下幾點：

1、在雙試劑測定時，加入試劑1和樣品后的吸光度可一定程度上扣除樣本空白，所以有單試劑不能扣除樣本空白的說法。

2、現(xiàn)在優(yōu)質(zhì)的試劑的抗干擾能力都比較強(qiáng)，比如有些雙試劑，R1加入后先和樣本孵育一段時間，將血紅蛋白、脂肪、膽紅素等反應(yīng)掉，再加入R2開始測定反應(yīng)。在一定范圍內(nèi)都可以消除樣本空白。

3、現(xiàn)代全自動生化儀大多采用雙波長測定。雙波長測定的原則是根據(jù)干擾組分和待測物質(zhì)吸收光譜的峰形特征，選擇兩個波長和，使干擾組分在這兩個波長處的吸光系數(shù)相等，而使待測物質(zhì)在兩波長處的吸光系數(shù)有顯著差別。以兩波長分別測定分析溶液的吸光度，以兩個吸光度值之差（△A）計算。這也可以扣除一部分樣本空白。

4、有些儀器，例如日立系列，有專門的“血清信息”功能的設(shè)置。做法都是單獨占用一個空白通道來計算，這也叫做樣品空白校準(zhǔn)。

（三）試劑空白：

由于生化測試測量的吸光度為相對吸光度，所以從理論上說，所有終點法的測試都需要把試劑本身的吸光度扣除。試劑本身的吸光度就是試劑空白。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量，把樣本換成蒸餾水來測量。

在傳統(tǒng)手工方法中，每次測定都要做至少三個管：測定管、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管。其中空白管是試劑加蒸餾水，測出來也就是試劑空白。因為操作環(huán)境、儀器狀態(tài)、試劑穩(wěn)定性等變異，所以要求每次都要測定試劑空白，稱為實時試劑空白。

在全自動分析儀上，大體上是模擬手工操作。但許多全自動分析儀為追求速度，在設(shè)計上采用一些折中方法來測定試劑空白。以日立全系列生化儀為例。該系列分析儀是做不了實時試劑空白，因為它們?nèi)窍燃尤霕颖竞蠹釉噭?，為了折中，只好在定?biāo)時做一個試劑空白，保存起來，需要扣除試劑空白時再減這個預(yù)先保存的值。這種做法，對于比較穩(wěn)定的試劑來講，對結(jié)果影響不大。